7.1. E. coli Besiyerleri
7.1.1. MUG ‘lu Besiyerleri (Merck)
Geliştirme koşullarından bağımsız olarak yeterli bir aktivite gösteren karakteristik yapısal enzimlerin belirlenmesi bakterilerde hızlı bir identifikasyon sağlamaktadır. E. coli, bir kaç Salmonella ve Shigella suşu dışında ß-D-glucuronidase (MUGase) enzimine sahip Enterobacteriaceae üyesi olan tek türdür. Bu enzim, 4-methylumbelliferyl-ß-D-glucuronide (MUG)’i uzun dalga boylu UV ışığı altında fluoresans veren 4-methylumbelliferon ‘a parçalar. E. coli aranması/sayılması için hazırlanan besiyerlerine MUG ilave edilmesi, geliştirilmesin bu besiyerinde yapılması ve sonuçta sıvı kültürün/koloninin uzun dalga boylu UV lamba ile kontrolü E. coli tayinini hemen hemen bitirmektedir. Sahte pozitif reaksiyonlardan kurtulmak için indol testi yeterli olmaktadır. Hepsi Merck/fluorocult cinsi olmak üzere; BRILA (Brillant Green Bile Broth), CASO (Tryptic Soy) Agar, DEV Lactose Peptone Broth, ECD (E. coli direct) Agar, Lauryl Sulphate Broth, LMX Broth besiyerlerinde UV ile fluoresans pozitif alındıktan sonra doğrudan sıvı besiyerinde gelişen kültürün üzerine veya katı besiyerinde gelişen koloni üzerine Kovac’s indol ayıracı damlatılarak indol testi yapılır. Floresan ve indol pozitif tek bakteri E. coli ‘dir.
Bazı kültürlerde MUG reaksiyonu (fluoresans) net bir şekilde belirlenemez. Bu gibi durumlarda 1N NaOH ‘den 1 mL kadar ilave edilmesi ile fluoresans reaksiyon netleşir. MUG, selektif katkı olarak besiyeri üreten diğer firmalar tarafından da pazarlanmaktadır.
7.1.2. E. coli 0157: H7 Agar (Merck)
Enterohemorajik E. coli 0157: H7 ‘nin izolasyonu ve ayrımı için geliştirilmiş bir besiyeridir. Bileşimindeki sodium deoxycholate gram pozitiflerin gelişimini inhibe eder. Bromothymol blue pH indikatörü olarak sorbitolun kullanımını gösterir. Sorbitol pozitif bakteri kolonileri sarı renk alırken sorbitol negatif koloniler yeşil renkli olarak kalırlar. Sodium thiosulphate ve ammonium iron (III) citrate, H2S oluşturan patojenlerin ayrımında rol alır. E. coli 0157: H7, diğer E. coli suşlarından farklı olarak MUG negatif bir özellik gösterir. Bu besiyerinde gelişebilen farklı bakterilerin kültürel özellikleri aşağıdaki gibidir.
Bakteri Koloni rengi Presipitat MUG Sorbitol
E. coli 0157: H7 yeşilimsi – – –
Proteus mirabilis siyah-kahve – – –
Shigella sonnei yeşilimsi – + –
Enterobacter aerogenes sarı ± – +
7.1.3. Chromocult Coliform Agar (Merck)
Karakteristik bakteriyel enzimlerin kromojenik bir substrat ile belirlenmesine yönelik hızlı bir identifikasyon yöntemi ve bu yönteme dayalı besiyeridir. Kromojenik substrat besiyeri bileşimine dahil edilmiştir. İdentifikasyon, karakteristik koloni rengi ile bir anlamda tamamlanır. Renk bir kaç gün stabil kalır, pH ‘dan sıcaklıktan ve ışıktan etkilenmez. Renk, besiyerine difüze olmadığı için yüksek sayıda koloni varlığında dahi tek koloni izolasyonu mümkündür.
Besiyeri formülasyonu içinde yer alan seçilmiş peptonlar, pyruvate ve fosfat tampon aşırı hasar görmüş koliformlar için gelişme ortamı sağlar. Lauryl sulphate koliform bakteriler için bir olumsuzluk yaratmazken Gram pozitif bakterilerin gelişimini önemli ölçüde inhibe eder.
Koliform grubu bakteriler için karakteristik olan ß-D-galactosidase enzimi kromojenik bir substrat olan Salmon-GAL ile, E. coli için karakteristik olan ß-D-glucuronidase enzimi ise yine kromojenik bir substrat olan X-glucuronide ile belirlenir.
35-37 oC ‘da 24-48 saat inkübasyon sonunda koyu mavi-menekşe renkli koloniler üzerine Kovac’s çözeltici damlatılarak indol reaksiyonu belirlenebilir. Bu besiyerinde gelişen bakterilerin kültürel özellikleri aşağıdaki gibidir.
Citrobacter freundii kırmızı + – –
Klebsiella pneumoniae kırmızı + – –
Enterobacter cloacae kırmızı + – –
Salmonella enteritidis renksiz – – –
Shigella flexneri renksiz – – –
belgesi-793
